Это и флорентийская школа с ее непревзойденными шедеврами, и другие итальянские школы (в частности венецианская), а также богатая подборка фламандских полотен с известной серией автопортретов. Кроме живописи в галерее есть залы, посвященные античной скульптуре, и залы с богатейшей коллекцией гобеленов.

Здание галереи Уффици было построено архитектором Джордже Вазари по заказу семьи Медичи и первоначально предназначалось для административных помещений (uffici), откуда и название галереи. Начато строительство было в 1560 году, а закончилось двадцать лет спустя. Здание состоит из двух корпусов с лоджиями на нижнем этаже. В глубине оба строения соединены третьим корпусом с огромной аркадой, выходящей на набережную реки Арно. Внизу, с обеих сторон центрального двора в мощных пилонах образованы ниши, в которые помещены статуи XIX века, изображающие знаменитых деятелей Тосканы. Второй этаж прорезан огромными окнами, а третий представляет собой обширную лоджию. Кроме Картинной галереи, занимающей третий этаж, в здании находятся Государственные архивы, где хранятся раритетные документы по истории города. На нижнем этаже можно видеть остатки романской церкви Сан Пьеро Скераджо (увидевшие свет в 1971 году благодаря археологическим работам). Здесь можно познакомиться с бесценными фресками Андреа дель Кастаньо. На втором этаже расположен Кабинет рисунков и гравюр, где представлена уникальная коллекция, начало которой было положено в XVII веке по инициативе кардинала Леопольде Медичи. И на третьем этаже начинается бесконечный маршрут по величайшему музею мира. С 1737 года музей стал достоянием народа, после того как Анна Мария Людовика - последняя представительница семьи Медичи - передала его в дар городу. Галерея размещается в 45 залах, разделенных на секции